参考“靶向抗原的细胞毒T细胞增殖服务”
为了发现具有激活T细胞活性的胞内呈递抗原，一般方法是：使用外显子测序、病毒检测、HLA肽蛋白测序等方法后，再经过一系列生物信息流程筛选到目标抗原肽。然而，前述方法仅从理论上预测抗原肽的价值，而抗原肽冲击实验(Peptide pulsing)就是实践层面验证目标抗原肽+MHC复合物是否真正抗原激活T细胞的主要工具。抗原冲击肽的目的是测试外源性抗原肽在呈递到细胞表面后，是否可以激活效应T细胞活性。
抗原肽冲击试验实施的主要准备工作有：
1、已合成的目标抗原肽;
2、抗原呈递细胞，可以是分选后并经目标抗原刺激后的DC，最好是T2 Cell、RMS细胞等具有TAP缺陷型且主要表达HLA-A2亚型的工具细胞；
3、T细胞，最好是转染了pMHC相互作用TCR的T细胞，这里的TCR具有特定克隆型，是通过pMHC四聚体结合T细胞上的TCR，其TCR结构最好经单细胞TCR测序鉴定；
4、pMHC四聚体，用于钓取pMHC特异性的T细胞；
5、ELISPOT试剂盒，用于测定目标抗原肽刺激T细胞后IFN-gamma释放能力。
抗原肽冲击试验的案例分享：
1. 经抗原肽冲击试验验证的肿瘤突变抗原pMHC复合物具有激活T细胞活性的作用，验证后的pMHC复合物库用于治疗复发性实体瘤，1例胸腺瘤患者随访29个月为CR，1例转移性胰腺癌患者为PR，4例患者达到SD。
Neoantigen identification strategies enable personalized immunotherapy in refractory solid tumors. JCI, 2019
2. 通过抗原肽冲击试验验证多段TP53突变形成的抗原肽，具有同时激活CD4和CD8两种T细胞的能力，使T细胞可以识别内源性表达突变抗原肽。
Neoantigen screening identifies broad TP53 mutant immunogenicity in patients with epithelial cancers. JCI, 2019
3. 病毒感染触发T细胞对多种肿瘤相关抗原的反应性，EBV病毒 蛋白LMP1激活了CD4+ T细胞识别多种自生DC细胞递呈的慢性淋巴细胞性白血病相关抗原，为了验证这个过程，使用了抗原肽冲击方法刺激CD4+T细胞分泌IFN-gamma。
Mechanism of EBV inducing anti-tumour immunity and its therapeutic use. Nature, 2021
