胰腺导管癌基因异常剪切肽的抗原特异性T细胞检测试剂+抗原肽定量PCR引物

人类基因组中有95%的区域曾被认为是垃圾区域,该区域由“非编码蛋白”的基因组成。这里虽然能产生RNA,但是不产生蛋白质。然而,2025年5月发表于《Science》杂志的“Pancreatic cancer–restricted cryptic antigens are targets for T cell recognition” 挑战了这一传统观念:在胰腺癌中,这些被角落会“异常闪光”,翻译出只在癌细胞中存在的特殊肽段。而且,这些特殊肽段还可以活化T细胞免疫,成为肿瘤免疫治疗的新靶点群。

“非编码蛋白”的基因包括长非编码RNA(long noncoding RNAs, lncRNAs)、基因的5’端和3’端的非翻译区域(5′ and 3′ Untranslated Regions, UTRs),以及基因内部的内含子(intORFs)。但是,这些区域在特定条件下,比如非典型起始位点、移码(Frameshift)等异常机制下会启动表达,被翻译成肽段。这些肽段称为“非经典肽段”(noncanonical peptides)。其表达特征包括如下类型:

图片来自《Pancreatic cancer–restricted cryptic antigens are targets for T cell recognition》 (Science 2025), Canonical ORF = 经典开放读码框; 5′ uORF = 5′ unannotated ORF; 5′ overlap uORF = 5′ overlap unannotated ORF; intORFs = alternative reading frames; 3’dORF = 3′ downstream ORF; 3′ overlap dORF = 3′ overlap downstream ORF; lnRNA = long nocoding RNA

Pancreatic cancer–restricted cryptic antigens are targets for T cell recognition 经过严密的验证,从“非经典肽段”中,发现了胰腺癌组织特异性的7段多肽。根据适应性免疫理论,如果这些神秘抗原只在癌细胞中产生,正常细胞中不表达,它们就可以成为非常理想的T细胞靶点,该研究确认了这7段多肽具有活化T细胞的能力。

7段多肽的发现过程可看全文了解,在此不再赘述。

这7段多肽的抗原特异性T细胞活性经过了以下方法验证,证明了这些多肽具有胰腺癌免疫治疗潜力:

胰腺癌非典型抗原肽表达特性

使用RNA-seq、免疫质谱、Ribo-seq检测11个患者胰腺癌组织类器官后,得出抗原肽的表达方式和患者表达比例。而后,使用抗原肽活化抗原特异性T细胞,并使用单细胞TCR测序获得抗原特异性TCR序列,克隆TCR序列表达于Jurkat-T后测试TCR亲和力。获得如下数据:

基因抗原肽编码异常类型高表达组织占胰腺癌患者的比例TCR亲和力
INSIG2HIFHLSLARV5′ Overlap uORF50%低亲和力
DDX47KLFLWPYKVOut-of-Frame42%高亲和力
RB1CC1LLWRISSSV3′ dORF25%低亲和力
LDHBGAYFFRHLKOut-of-Frame17%未测
CTDSPL2ILQDRLWKLOut-of-Frame17%低亲和力
TMED10RGNLPLPLKOut-of-Frame8%未测
NRASALFSKLASA3′ dORF8%中等亲和力

胰腺癌非典型抗原肽HLA复合物产品

由于上述7种非典型抗原肽未表达于正常组织,因此是靶向胰腺癌肿瘤细胞极好的靶点。从免疫细胞治疗角度看,这7种抗原肽具有活化T细胞,增殖且活化抗原特异性T细胞的能力,是肿瘤疫苗和免疫细胞治疗的新型靶点。根据文中已验证的结果,我们开发了非典型抗原肽HLA荧光四聚体,用于评估靶向胰腺癌肿瘤细胞的抗原特异性T细胞含量。

基因非典型抗原肽HLA荧光四聚体价格
INSIG2INSIG2-HIFHLSLARV-HLA-A*02:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug, 19600元/200ug
DDX47DDX47-KLFLWPYKV-HLA-A*02:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug, 19600元/200ug
DDX47DDX47-KLFLWPYKV-HLA-A*32:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug
RB1CC1RB1CC1-LLWRISSSV-HLA-A*02:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug
LDHBLDHB-GAYFFRHLK-HLA-A*11:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug
CTDSPL2CTDSPL2-ILQDRLWKL-HLA-A*02:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug
TMED10TMED10-RGNLPLPLK-HLA-A*11:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug
NRASNRAS-ALFSKLASA-HLA-A*02:01 PE/APC/Alexa Fluor 488 荧光四聚体7800元/50ug, 12800元/100ug

抗原对应的TCR序列可点击:

胰腺癌非典型抗原肽的组织表达定量PCR引物

为了判断胰腺癌组织中是否会表达抗原肽,定量PCR检测抗原肽的RNA是一种简洁快速的方法。我们根据抗原肽定位的转录本,提供了SYBR Green法定量PCR检测引物,供研究者使用。

基因抗原肽引物1 引物2
INSIG2HIFHLSLARVCATATATTTCATCTGTCACTAGCCAGAGTGGCTTGCAATCACATCAGGTGGA
DDX47KLFLWPYKVAAGCTATTCCTTTGGCCTTACAAGGTCTCCCGAGTCGGGGTAAGAACTAG
RB1CC1LLWRISSSVCTATTATGGAGGATTTCTAGCTCAGTGTGAATTCTGTGAGCTTATACCTCAC
LDHBGAYFFRHLKGGAGCTTATTTCTTCAGACACCTAAAAGAAGACATTAACATTTCTCTGCACCA
CTDSPL2ILQDRLWKLATTCTCCAGGACAGGCTGTGGAAGCTGCCATTGTTTAGTGATGGTCTCACTTGAACTG
TMED10RGNLPLPLKAGGGGAAATTTGCCTTTACCACTGAAGCAACTTTTGCAATCTCTTCGTAATTTTTCGCC
NRASALFSKLASAGCTCTATTCTCTAAACTGGCATCTGCTGTCTACAAACCACTTCTAGGAAAAAGGC

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