本项技术由上海浩生医疗科技有限公司独加授权桂芎生物使用本技术。
本项技术提供了抗原肽与HLA-I结合能力的评估服务，筛选真正被HLA-I呈递结合的抗原肽。
该技术用于抗原特异性T细胞的各种应用，比如肿瘤疫苗靶点筛选，肿瘤新生抗原特异性T细胞的MHC-1多聚体合成，比如病毒疫苗相关的抗原特异性T细胞数量评估。
技术原理
本技术服务的主要原理是：在适配抗原肽存在的情况下，HLA重链结合B2M与抗原肽会形成构象稳定的复合物，使用抗B2M-HRP标记抗体作为检测抗体，链霉亲和素或抗HLA抗体作为包被物，通过ELISA夹心法可检测稳定复合物的存在，并通过显色强度可以判断抗原肽-MHC复合物浓度，从而推断抗原肽与MHC的结合能力。
若待测抗原肽无法与HLA结合，则无法形成稳定的复合物，检测抗体会被洗脱掉，从而ELISA结果会呈现阴性状态。
应用价值
- 肿瘤新生抗原筛选：评估肿瘤突变蛋白片段的被呈递能力，判断具有HLA特异性的肿瘤突变蛋白片段免疫原性。
- 肿瘤疫苗靶点评估：用于多样性HLA等位基因型结合的多肽谱筛选与评估。
- 肿瘤TCR-T前期靶点验证：通过验证抗原肽MHC复合物，从而扩大产量合成MHC多聚体，以获取抗原特异性T细胞克隆。
- 病毒抗原肽筛选：评估病毒抗原突变片段的被呈递能力，判断多样性HLA等位基因型结合的多肽抗原谱。
- 疫苗免疫力评估：通过疫苗预设的抗原片段，确定抗原特异性T细胞特征以评估疫苗疗效。
- 自身免疫抗原筛选：评估自身抗原片段的被呈递能力，判断具有HLA特异性的自体蛋白原性。
- 器官移植抗原的筛选：同时扫描供者和受者HLA特异性抗原片段，鉴定并验证免疫排斥的新型靶点。
检测模式
本方法根据HLA与抗原肽的配对方式，可有三种检测模式：
抗原肽筛选模式
该模式下，使用单一HLA类型结合多种抗原肽段，通过ELISA检测筛选出具有HLA亲和力的肿瘤新生抗原、病毒抗原肽、自免抗原、器官移植抗原，适用于应用价值中1、4、6、7种应用。用户指定的单一HLA类型由我方提供，用户提供多种多肽，在我方平台完成ELISA检测实验。
HLA适配模式
目标抗原肽在明确之后，通过扫描多种HLA类型以评估抗原肽亲和的HLA类型，从而根据HLA的人群分布频率评估适用的人群范围。疫苗开发引入该模式可评估适用人群的广泛性。用户指定的各种HLA类型均可由我方提供，用户提供单一多肽，在我方平台完成ELISA检测实验。
复合物验证模式
若后续工作是为了进一步扩大pMHC的产量，以用于TCR类抗体的开发、抗原特异性T细胞的临床检测、以及相关制药和器械产品开发，则可以针对文献、专利已验证的工艺，通过本检测进行原料验证，验证HLA、肽、B2M、折叠组装缓冲液、纯化体系的验证。
检测所需材料
- 肽：1mg干粉，由用户提供材料，或由用户提供肽段信息我方进行合成；
- HLA单体蛋白：由用户指定HLA亚型(例如：HLA-A*02:01)，我方提供单体蛋白；
- B2M：我方提供；
- 折叠组装缓冲液：我方提供;
- 阳性参照：是通过抗原特异性T细胞流式检测实验验证的pMHC复合物, 比如CMVpp65-HLA-A*02:01，我方提供;
- 阴性参照：是未结合肽的MHC空载复合物，我方提供。
交付结果
每个待测孔 (含MHC和多肽) 光密度 (OD) 与空白孔的比值，同时检测阳性参照和阴性参照。
实测数据
案例二：Cell Res：樊嘉/高强团队利用mRNA异常剪接，开发肝癌mRNA新抗原疫苗 该文使用了本司的pMHC亲和力高通量ELISA检测服务(试剂盒来自：上海浩生医疗科技有限公司独家授权本公司使用)。本案例原文《Harnessing alternative splicing for off-the-shelf RNA neoantigen vaccines in hepatocellular carcinoma 》“method” 部分 “ pMHC ELISA小段”.
